El cultivo de Mycoplasma pneumoniae representa un importante reto para el laboratorio de Bacteriología, debido a sus características de crecimiento y variedad de requerimientos nutricionales. El control de calidad de los medios de cultivo es un proceso que debe ser continuo y se extiende desde las materias primas hasta el producto final. En este trabajo se evaluaron varios medios de cultivo para M. pneumoniae, preparados de manera “casera” en el laboratorio, empleando estrictas medidas de control de calidad. El objetivo era disminuir el costo en la preparación de los mismos y estandarizarlos para el mantenimiento de cepas, para su uso posterior como apoyo para la evaluación de técnicas de biología molecular para el diagnóstico rápido. De esta manera se obtuvieron resultados óptimos en el crecimiento de la cepa de M. pneumoniae en cada uno de los medios evaluados.